**RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养指南**

一、细胞培养条件

细胞名称：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640 + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：第一次建议1:2传代
传代情况：每2天换液
备注：用无菌离心管收集培养基，留作对比培养备用。如对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基——尊龙凯时人生就博。

二、细胞收到后的处理

细胞收到后，应培养至良好状态，再灌满完全培养液并封好瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。在处理前，用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，之后进行观察并拍照（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是售后保障的重要依据，如未提供照片则默认状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 优先确保未超过80%汇合度时，将培养液收集至离心管中，保留5ml培养基
2. 如细胞密度超过80%，即可进行传代培养。具体步骤如下：
   1) 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS清洗1-2次。
   2) 添加1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA），置于37℃培养箱中消化1-2分钟。
   3) 轻轻吹打以使细胞完全脱落，然后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
   4) 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，并用PBS洗涤一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化。
3. 将悬液转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
4. 弃去上清液，沉淀细胞，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混合后转移至冻存管中，并存放于-80℃冰箱中以备后续使用。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护装备），迅速置于37℃水浴中解冻，待无结晶后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清液，沉淀细胞，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基以持续培养。

四、注意事项

请注意，有些细胞贴壁不牢，在运输过程中可能会出现细胞脱落，这是正常现象。可将培养液收集到离心管，进行相应的清洗和重悬处理。确保在培养时，操作过程的无菌性，以提高细胞成功存活率。

五、售后条款

如细胞出现问题，一定要及时联系我们。问题类型包括但不限于：
1. 运输过程中的细胞问题（如丢失、瓶身破损、培养液漏液等）。
2. 收到细胞后48小时内提供有效的实验结果以确认细胞污染。
3. 确保细胞活力，如在7天内提供真实的实验结果并通过台盼蓝染色法检测。
如因客户操作不当或非推荐的培养条件导致的问题，将不予重发。

在细胞研究领域，尊龙凯时人生就博致力于提供更好的支持和服务，确保每位研究者能够顺利开展实验。