尊龙凯时人生就博提供的MOPC小鼠少突胶质前体细胞培养说明书如下:
一、细胞培养条件
细胞名称:MOPC小鼠少突胶质前体细胞
生长特性:贴壁生长
冻存条件:使用无血清冻存液(货号:C7001)
培养体系:DMEM+10% FBS+1%双抗
传代方法:建议第一次传代比例为1:2,传代后每2天更换培养基。注:请使用无菌离心管收集培养基以进行对比培养,若对比培养效果不理想,建议直接购买尊龙凯时人生就博的完全培养基。
二、细胞处理建议
细胞收到后,建议培养至良好状态,灌满完全培养液并封好瓶口,以保证细胞在运输过程中的健康。收到细胞后,用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒,然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时,以稳定细胞状态。随后,通过显微镜观察细胞生长情况,保存不同倍数的照片(推荐40x、100x、200x各一张)。前三天的照片将成为重要的售后依据,如果未提供照片,则默认收到的细胞状态良好。
三、细胞培养步骤
a. 细胞传代:
如果细胞汇合度低于80%,请收集培养液并留5ml培养基在37℃、5% CO2中培养;若密度超过80%,可以进行以下步骤:
- 弃去培养上清,使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
- 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞状态,若细胞开始变圆并脱落,立即加5ml完全培养基终止消化。
- 轻轻吹打细胞后,将悬液转移至15ml离心管中,在1000RPM条件下离心5分钟,然后去掉上清,加入1-2ml完全培养基重悬。
- 按照1:2的比例分瓶传代(即两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。
b. 细胞冻存:
- 细胞覆盖培养瓶的80%时,弃去培养液并用PBS清洗一次。
- 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶,观察细胞状态,当细胞回缩变圆后,加入5ml完全培养基终止消化,轻轻吹打使其脱落,再将悬液转移至离心管。
- 在1000RPM条件下离心5分钟后去上清,加入1ml无血清冻存液(货号:C7001),混匀后转入冻存管中。
- 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱储存,如需转入液氮罐,需在-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。
c. 细胞复苏:
- 从液氮中取出冻存管(佩戴防护面具),迅速放入37℃水浴中解冻,直到无结晶,随后用75%酒精擦拭外壁。
- 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中,1000RPM离心5分钟。
- 去上清,沉淀后用5ml完全培养基重悬,接种至T25培养瓶中,放置于37℃、5% CO2培养箱中。
- 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项
在运输过程中,部分细胞可能因贴壁不牢而脱落,这是正常现象。如脱落较多,可将培养液收集至离心管,离心后进行处理。请确保操作时的优良习惯,以减少细胞的损失。
五、售后条款
- 关于细胞问题的重发情形及标准:
- 由于运输问题造成的细胞损失、瓶身破损等,申请重发;
- 收到后48小时内若发现污染,需提供真实实验结果,核实后可重发;
- 常温发货细胞或干冰冻存细胞复苏后状态不良需提供照片,可重发;
- 活性问题在收到7天内提出,使用台盼蓝染色法鉴定,核实后重发;
- 若无前3天照片,则视为产品合格;
- 不予重发的情况包括:客户自身造成的污染、操作不当、未按照推荐培养体系使用等。
如需进一步信息或支持,请随时联系尊龙凯时人生就博,我们将竭诚为您服务。