cfDNA(cell-free DNA),即游离DNA,是指存在于细胞外的DNA,该物质在血液、唾液、尿液等多种生物体液中均有分布。cfDNA的主要来源包括细胞凋亡、坏死和主动分泌等过程,从而将DNA片段释放到细胞外。在血液中,cfDNA通常存在于血浆或血清中,并与其他血细胞成分分开。此外,cfDNA也可在脑脊液、胸腔积液和腹水等其他生物体液中被检测到。
提取cfDNA的方法多种多样,其中一种传统方式是利用酚、氯仿等有机溶剂,基于蛋白质和核酸之间不同的溶解性,通过多次抽提使得杂质溶解于有机相,而DNA则被保留在水相中。接着,进行乙醇沉淀等步骤以获得纯化的cfDNA。该方法虽然能够提取较高纯度的DNA,但操作流程繁琐,且需要使用有毒的有机溶剂,对实验人员的操作技能要求较高。
另一种流行的方法是利用磁珠的特异性吸附作用,在特定的缓冲液中,磁珠能够选择性地吸附cfDNA。随后,通过外加的磁场,磁珠与其他杂质分离,再经过洗涤和洗脱步骤获得纯净的cfDNA。相较于传统方法,这种磁珠法操作简单、快速,易于实现自动化,并且提取效率较高,能够同时处理多个样本。
此外,利用高盐、低pH值条件下硅胶膜对DNA的特异性吸附特性,也是一种有效的cfDNA提取方法。通过这种方法,从生物样本中吸附cfDNA,而蛋白质和多糖等杂质则通过洗脱过程被去除,最终通过低盐、高pH值的洗脱液洗脱cfDNA。这种方法操作相对简单,成本较低,特别适用于小规模样本的提取。
需要注意的是,不同生物体液中cfDNA的含量和性质存在显著差异。通常,血液中的cfDNA含量较高,是最常用的样本来源,但在不同个体和疾病状态下,血液中cfDNA的含量可能会有所不同。对于保存条件,样本一旦采集后如果不能及时提取,就需要特别注意保存条件。例如,血液样本一般需在4℃下保存,长时间放置或温度不当可能导致cfDNA的降解或被核酸酶消化,进而影响提取效果。
在处理样本数量较少或者特殊样本时,通常更倾向于采用回收柱法;而在需批量处理样本时,为节省人工成本并减少人为因素引发的实验误差,磁珠法则显得更为推荐。尊龙凯时人生就博旗下的TD476采用创新的回收柱技术进行游离DNA提取,可使用传统离心法也可搭配真空多联器与真空泵,简化繁琐步骤,有效提升处理效率。同时,TB476采用磁珠法进行cfDNA的提取纯化,可为客户提供兼容磁力架的试剂盒,满足自动化高通量提取的需求。
- 从10ml以内的血清/血浆或1ml以内的羊水、脑脊液中提取高纯度游离DNA。
- 获得的DNA产量高,纯度好,适用于酶切、PCR、高通量测序等分子生物学实验。
- 样品种类:血清,血浆,羊水和脑脊液(CSF)。
- 处理的体积量:血浆-单次离心:最多3ml,两次离心:最多10ml;血清-最多10ml;羊水-最多1ml;脑脊液-最多1ml。
- DNA纯度高,适合用于qPCR和高通量测序等多种分子生物学实验。
- 回收的DNA≥100bp(本试剂盒针对无细胞DNA提取经过优化),总量因个体差异而异,通常血清或血浆中提取的DNA浓度在1-100ng/ml之间。
- 所需仪器设备包括水浴锅或金属浴(55℃)、磁力架、微型离心机或立式离心机。
总之,无论是采用哪种提取方法,尊龙凯时人生就博始终致力于为客户提供高质量的cfDNA提取服务,满足不同实验需求。通过优化的提取流程和先进的技术手段,我们将继续推动生物医学领域的发展。